Phân tích PCR: nó là gì? Làm thế nào để có những phân tích PCR

Nó không quá lâu trước đã phát triển một phương pháp đáng tin cậy, có độ nhạy cao và nhanh chóng cho việc chẩn đoán các bệnh truyền nhiễm khác nhau ở người. một phương pháp như vậy được gọi là "phân tích PCR". Điều gì là nó, là những gì bản chất của nó, những gì anh ta có thể xác định vi sinh vật và làm thế nào để có nó, chúng ta sẽ mô tả trong bài viết này.

Lịch sử phát hiện

Phát minh ra polymerase chain reaction (PCR) là một nhà khoa học Mỹ Keri Myullis vào năm 1983. Ban đầu, cấp bằng sáng chế phương pháp chẩn đoán bằng cách "Cetus Corporation", trong đó ông làm việc và tác giả của nó. Nhưng vào năm 1992 tất cả các quyền và bằng sáng chế đã được bán cho công ty "Hoffman-La Roche." Sau đó, nó bật ra rằng nghiên cứu tương tự được tiến hành song song và đã được báo cáo bởi các nhà sinh học Mỹ khác, chẳng hạn như Elis Chen, David Edgar, John RRE. Năm 1980, ông tham gia vào vấn đề này và các nhà khoa học Liên Xô A. Slyusarenko A. Kaledin và S. Gorodetsky. Vì vậy, để xác định chủ sở hữu quyền tác giả duy nhất đã không thể thực hiện được. Nhiều nhà sinh hóa nổi bật đã góp phần vào sự phát triển của phương pháp phản ứng polymerase và CERN cấp bằng sáng chế phát minh của họ. Tại phân tích quan điểm này PCR được thực hiện trong suốt các phòng thí nghiệm được trang bị đặc biệt.

TÓM TẮT PCR chẩn đoán

phân tích PCR: nó là gì và như thế nào? Bản chất của phương pháp này nằm trong thực tế là bằng cách sử dụng một DNA polymerase enzym đặc biệt trong ống nghiệm để tăng về khối lượng môi trường vi khuẩn cụ thể. Để làm nguyên liệu DNA lặp đi lặp lại nhân có sẵn này. Như vậy, sự hiện diện của một mầm bệnh trong một mẫu số tiền sẽ được tăng tại các chi phí của thao tác trong phòng thí nghiệm sinh hóa, và vi khuẩn sẽ không khó phát hiện trong kính hiển vi.

Làm thế nào là nghiên cứu của vật liệu?

Để thực hiện việc phân tích yêu cầu:

• Mẫu ADN;
• mồi liệu kết nối đầu của đoạn;
• chịu nhiệt enzyme DNA polymerase;
• hóa chất, đảm bảo hoạt động đúng đắn của các enzym;
• dung dịch đệm là cần thiết cho việc tạo ra các điều kiện thích hợp cho sự phát triển và xây dựng tài liệu DNA.

Để thực hiện PCR hoạt động lặp đi lặp lại 25-30 gồm ba bước: biến tính, ủ và kéo dài.

Để phân tích phản ứng dây chuyền polimezarnoy sử dụng một thiết bị đặc biệt - chu trình. thiết bị hiện đại cho phép bạn cài đặt các hệ thống sưởi và ống làm mát chương trình cần thiết để loại bỏ sai sót trong chẩn đoán.

Trong trường hợp áp dụng các chẩn đoán?

Polimezarnoy phương pháp phản ứng dây chuyền được sử dụng trong các lĩnh vực khác nhau của y học:

• Forensic sử dụng nó để xác định các vật liệu di truyền, chẳng hạn như tóc, nước bọt hoặc máu;
• phân tích PCR máu giúp kiểu gen, ví dụ cho việc phát hiện các cá nhân đáp ứng trồng gen để một loại thuốc cụ thể;
• bởi một phương pháp thiết lập các mối quan hệ gia đình giữa con người;
• phương pháp PCR-mong đợi nhất đã trở thành trong chẩn đoán y tế để xác định các bệnh truyền nhiễm khác nhau.

Có gì nhiễm trùng tiết lộ PCR?

Vì vậy, y học từ lâu đã được sử dụng thành công phân tích PCR. nó là gì, chúng ta đã học. Và một số tác nhân gây bệnh có thể được phát hiện với nó? PCR chẩn đoán sau nhiễm trùng :

• viêm gan A, B, C;
• ureaplasmosis;
• candida;
• chlamydia;
• mycoplasmosis;
• nhiễm khuẩn âm đạo;
• bạch cầu đơn nhân nhiễm trùng;
• trichomonas;
• nhiễm HPV;
• bệnh lao;
• nhiễm herpes của 1 và loại 2;
• Helicobacter pylori nhiễm trùng;
• cytomegalovirus;
• bạch hầu;
• salmonella;
• nhiễm HIV.

Ngoài ra, phương pháp PCR được sử dụng trong chẩn đoán ung thư.

ưu điểm của phương pháp này

Chẩn đoán PCR có nhiều ưu điểm:

1. độ nhạy cao. Thậm chí chỉ với một vài phân tử DNA vi sinh vật phân tích PCR xác định sự hiện diện của nhiễm trùng. Nó giúp phương pháp đối với các bệnh mãn tính và tiềm ẩn xảy ra. Thông thường trong trường hợp này, các vi sinh vật là không canh tác theo những cách khác.
2. Để điều tra bất kỳ vật liệu phù hợp, chẳng hạn như nước bọt, máu, chọn lọc giới tính, tóc, tế bào biểu mô. Phổ biến nhất là một xét nghiệm máu và tăm niệu sinh dục PCR.

3. Không đòi hỏi một nền văn hóa phát triển mở rộng. Quá trình tự động chẩn đoán cho phép để có được kết quả của một nghiên cứu sau 4-5 giờ.
4. Phương pháp này là gần như hoàn toàn đáng tin cậy. Ghi nhận các trường hợp chỉ bị cô lập của kết quả âm tính giả.
5. Khả năng nhận diện một số loại mầm bệnh trong một tài liệu mẫu. Điều này không chỉ tăng tốc quá trình chẩn đoán của bệnh, mà còn làm giảm đáng kể chi phí nguyên liệu. Thông thường, các bác sĩ kê toa một phân tích toàn diện của PCR. khảo sát giá cả, bao gồm xác định sáu mầm bệnh, là khoảng 1.500 rúp.

Kiến nghị về việc chuẩn bị cho phân tích

Các kết quả có giá trị nghiên cứu PCR cần phải được kiểm tra, theo kiến nghị của công tác chuẩn bị sơ bộ cho việc chẩn đoán:

1. Trước khi giao hàng của nước bọt nên tránh ăn uống và thuốc trong vòng 4 giờ trước khi lấy mẫu vật liệu. Ngay trước khi các thủ tục, súc miệng bằng nước đun sôi.
2. Các quy tắc trên phải được hướng dẫn và khi lấy mẫu từ bên trong má. Sau khi rửa được khuyến khích để thực hiện massage nhẹ trên da để phát hành tiết tuyến tiền liệt.
3. Nước tiểu thường được thu thập ở nhà. Để làm điều này, bạn cần phải tiến hành một nhà vệ sinh kỹ lưỡng của bộ phận sinh dục. Trong một thùng nhựa vô trùng là cần thiết để thu thập 50-60 ml nước tiểu. Nó khuyến khích cho phụ nữ để chèn tampon vào âm đạo, và nam giới càng nhiều càng tốt để kéo da gấp để đảm bảo độ tinh khiết của vật liệu. Bạn không thể lấy các vật liệu trong suốt chu kỳ kinh nguyệt.
4. Đối với giao hàng của tinh trùng để tránh quan hệ tình dục trong 3 ngày trước khi bộ sưu tập các tài liệu. Ngoài ra, các bác sĩ nên từ bỏ việc sử dụng các phòng tắm hơi và tắm nước nóng, rượu và thức ăn cay. Trong 3 giờ trước khi phân tích là cần thiết để tránh đi tiểu.
5. Để vượt qua những bôi nhọ niệu sinh dục, ví dụ, nếu phân tích trên chlamydia PCR, cả phụ nữ và nam giới được khuyến cáo rằng phần còn lại tình dục trong 3 ngày. 2 tuần trước khi phân tích không thể dùng thuốc kháng sinh. Đối với một tuần bạn cần phải ngừng sử dụng gel thân mật, thuốc mỡ, thuốc đạn âm đạo, thụt rửa. 3 giờ trước khi nghiên cứu nên tránh đi tiểu. Trong kinh nguyệt hàng rào vật chất không được thực hiện, chỉ 3 ngày sau khi kết thúc đốm có thể mất bôi nhọ niệu sinh dục.

PCR trong khi mang thai

Thời gian chờ đợi một em bé, nhiều bệnh truyền nhiễm, bệnh lây truyền qua đường tình dục, là cực kỳ nguy hiểm cho sự phát triển của thai nhi bình thường. STDs có thể kích hoạt sự phát triển trong tử cung, sẩy thai hoặc sinh non, dị tật bẩm sinh của đứa trẻ. Do đó, điều quan trọng là để có được trong thời kỳ mang thai đầu sàng lọc PCR. Vượt qua phân tích là cần thiết khi đăng ký - lên đến 12 tuần.

liệu hàng rào xuất phát từ kênh cổ tử cung với một bàn chải đặc biệt. Thủ tục không đau và không gây nguy hiểm cho em bé. Thông thường khi mang thai đã phân tích cho phương pháp PCR Chlamydia, cũng như ureaplasmosis, mycoplasmosis, cytomegalovirus, herpes, u nhú ở. kiểm định tổng hợp như vậy gọi là PCR 6.

PCR để chẩn đoán HIV

Do thực tế là phương pháp phản ứng chuỗi polymerase là rất nhạy cảm với những thay đổi trong cơ thể và các điều kiện của chẩn đoán, nhiều yếu tố có thể ảnh hưởng kết quả. Do đó phân tích PCR phát hiện nhiễm HIV không phải là một phương pháp đáng tin cậy, hiệu quả của nó - 96-98%. Còn lại 2-4% của các thử nghiệm cho kết quả dương tính giả.

Nhưng trong một số tình huống mà không cần chẩn đoán PCR HIV không thể làm. Thông thường, nó được thực hiện cho những người có âm tính giả ELISA. Những con số này cho thấy rằng người đó vẫn chưa phát triển kháng thể chống lại virus và không thể phát hiện mà không làm tăng số lượng nhiều. Rằng đây có thể đạt được bằng cách thực hiện một phương pháp xét nghiệm máu PCR.

Cũng cần thiết là một chẩn đoán trẻ em năm đầu tiên của cuộc sống, sinh ra từ mẹ nhiễm HIV dương tính. Phương pháp này là cách duy nhất để chắc chắn xác định tình trạng của đứa trẻ.

PCR để chẩn đoán viêm gan

Polymerase phương pháp phản ứng dây chuyền cho phép phát hiện DNA của virus viêm gan A, B, C, trước khi sự hình thành kháng thể chống lại nhiễm trùng hoặc khởi phát triệu chứng. Đặc biệt hiệu quả là phân tích PCR trên bệnh viêm gan C, vì 85% bệnh như vậy là không có triệu chứng và không điều trị kịp thời sẽ trở thành mãn tính.

phát hiện kịp thời các mầm bệnh sẽ giúp tránh các biến chứng và điều trị lâu dài.

sàng lọc tích hợp PCR

Phân tích toàn diện PCR: nó là gì? Đây phản ứng khảo sát phương pháp polimezarnoy chuỗi, trong đó bao gồm định nghĩa của một số loại bệnh nhiễm trùng: Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, Candida, Trichomonas, cytomegalovirus, ureaplasmas urealitikum, herpes 1 và loại 2, bệnh lậu, u nhú ở người. Giá của chẩn đoán này dao động từ 2.000 đến 3.500 rúp. tùy thuộc vào bệnh viện, vật tư thiết bị, cũng như trên các loại phân tích: định tính hoặc định lượng. Điều cần thiết trong trường hợp của bạn - bác sĩ quyết định. Trong một số trường hợp, bạn chỉ đơn giản là phát hiện sự hiện diện của mầm bệnh ở những người khác, chẳng hạn như HIV, vai trò quan trọng bởi hiệu giá định lượng. gọi là "phân tích PCR của 12" trong chẩn đoán của tất cả các kiểm tra mầm bệnh trên.

Việc giải mã các kết quả phân tích

phân tích Transcription PCR là đơn giản. Chỉ có 2 quy mô index - "tiêu cực" "tích cực" và Khi phát hiện mầm bệnh có thể bác sĩ với 99% độ tin cậy -TH xác nhận sự hiện diện của căn bệnh này và bắt đầu điều trị của bệnh nhân. Trong phương pháp định lượng xác định nhiễm ở một số chỉ số cột tương ứng của vi khuẩn được phát hiện sẽ được xác định. Chỉ có một bác sĩ có thể xác định mức độ của bệnh và kê đơn điều trị cần thiết.

Trong một số trường hợp, ví dụ như trong việc xác định nhiễm HIV bằng phương pháp PCR, với kết quả âm tính, có một nhu cầu điều tra bổ sung để xác nhận những con số này.

Nơi để đi xét nghiệm?

Trong trường hợp vượt qua-PCR phân tích trong phòng khám công cộng hoặc một phòng thí nghiệm tư nhân? Thật không may, trong các thiết bị cơ sở y tế địa phương và các phương pháp thường lỗi thời. Vì vậy nó là tốt hơn để dành ưu tiên cho các phòng thí nghiệm riêng với thiết bị hiện đại và nhân viên có trình độ cao. Ngoài ra, trong một phòng khám tư nhân bạn có được kết quả nhanh hơn nhiều.

Tại Moscow, nhiều phòng thí nghiệm tư nhân cung cấp phân tích PCR các bệnh nhiễm trùng khác nhau. Ví dụ, tại các phòng khám như "Vita", "Tích hợp Clinic", "gia đình hạnh phúc", "Uro-Pro", tiến hành phân tích PCR. giá khảo sát là 200 rúp. để xác định một mầm bệnh.

Có thể kết luận rằng việc chẩn đoán các bệnh truyền nhiễm bằng phương pháp PCR trong hầu hết các trường hợp là một cách nhanh chóng và đáng tin cậy của việc phát hiện mầm bệnh trong cơ thể ở giai đoạn đầu của nhiễm trùng. Tuy nhiên, trong một số trường hợp, để lựa chọn các phương pháp khác của chẩn đoán. Xác định sự cần thiết của một nghiên cứu như vậy chỉ có thể là một chuyên gia. PCR phân tích giải mã cũng đòi hỏi một cách tiếp cận chuyên nghiệp. Làm theo lời khuyên của bác sĩ và không cho xét nghiệm của riêng mình, mà không cần thiết.